Objectif 100X à immersion et qualité des photos

Pour les questions, les techniques, astuces, ... en microscopie et réactifs chimiques.
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Chimix

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Message par Chimix »
Bonjour à tous!

Je suis un nouveau membre et il me tarde de publier dans ce forum. Mais je suis déçu par la qualité de mes microphotographies, particulièrement celles des spores, par exemple, réalisées avec l'objectif 100X à immersion (huile). Voyez ainsi la photo ci-jointe:
TS-20221206212703182.jpg
J'ai vu ici et là, dans ce forum, des images bien mieux résolues et contrastées. J'utilise pourtant un objectif de "qualité", i.e. Plan Achromatique et corrigé à l'infini. Une caméra 5 MPx est fixée sur la sortie photo de mon microscope trinoculaire et je fais de mon mieux pour la mise au point. Alors, où le bat blesse-t-il? Quel est mon problème? Quel mode opératoire conseillez-vous pour tirer le meilleur parti d'un tel objectif?

Avec les autres objectifs, les résultats semblent meilleurs. Jugez-en avec l'image suivante d'une diatomée marine (Grammatophora oceanica), au centre, réalisée avec un objectif Plan Achromatique 40X Ph2 (contraste de phase et filtre vert):
grammatophoraOceanica.jpg




Mille fois merci pour l'attention que vous porterez à la présente et pour vos réponses éventuelles,
Alain.
Je sais que je ne sais rien ( Socrate et ...moi! )

Jean Pierre

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Message par Jean Pierre »
Bonjour,

Difficile de répondre, à première vue on dirait que la mise au point n'a pas été faite et un manque de lumière.
Jean Pierre Raverat.
http://www.champignons77.org/

Chimix

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Message par Chimix »
Bonsoir Jean Pierre,

Merci pour ta réponse !

Manque de lumière: certainement! En effet, j'essaie d'économiser l'énergie et de prolonger la durée de vie du filament de mon ampoule basse tension (6volts). Avouons que c'est un peu stupide!!! Je dois songer à passer à l'éclairage LED!

Quant à la mise au point: peut-être! Ma caméra ne dispose pas de MAP automatique et je fais pour le mieux...

Ou alors l'objectif serait-il en cause? Ou la propreté des lames et lamelles? Ou encore un mauvais réglage de Köhler? Je compte acquérir prochainement un objectif à immersion 100X Ph3 (contraste de phase donc). J'en attends des merveilles et espère publier enfin des photos de spores fongiques dignes de ce nom!!!

Encore mille fois merci pour la réponse,
Alain.
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IOlivier

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Message par IOlivier »
J'en suis un peu là moi aussi, j'ai tout dabord changer ma camera usb pour une 5mpx ca va mieux..... mais ca manque de lumière, je doit moi aussi passé a un éclairage led aussi.
Pour y remedié, j'ai demonté et nettoyé tout les éléments du microscope et j'ai eu un gain significatif (avec un kit pour nettoyer les ecrans de portable pour poserun verre trempé, parfait ).

J'ai un x40 je pense aussi a un x100 ou x60 mais je pense qu'il faut que je change ma lumière avant 'c’est bien beau de grossir mais faut que le reste suive, du coup je pense passé a un x60, de plus les x100 sont a bain d'huile et son beaucoup plus fragile.

Ca a l'air d’être comme quand on trafique sa mobylette, tu change une pièce et tu t’aperçois qu'il faut en changer une autre pour que ca suive :lol:

J'ai un vieux bressert biolux NV

Voila mes observations mais je reste débutant
Bonne journée

Chimix

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Message par Chimix »
Bonjour Olivier,

Merci pour ton intervention, je me sens moins seul!

Notre ami Fouad se pose beaucoup de questions à propos de la qualité de mes optiques, il pense même que mon objectif 100X à immersion dans l'huile déforme les images. A tel point de le rendre inapte à toute détermination impliquant la microcopie!

J'ai suivi ses conseils et photographié ces samedi et dimanche derniers, des spores de Agaricus bisporus, le champignon de Paris, élevé dans la région bruxelloise, et je vous présente ci-dessous les résultats...

D'abord avec l'objectif 40X, sans milieu de montage:
TS-20230212212622021.jpg
Ensuite avec le même objectif, mais dans l'eau:

TS-20230212214334179.jpg
Puis avec l'objectif 100X à immersion(huile) et toujours dans l'eau:
TS-20230212215301066.jpg
Et avec l'objectif 40X, mais dans l'acide lactique:
TS-20230213180650804.jpg
Pour terminer, objectif 100X et acide lactique toujours:
TS-20230213181206051.jpg
Manifestement, le milieu de montage influence l'aspect (ou le look, comme vous dites en France) des spores!

Que pensez-vous de mes nouvelles photos?
Fouad, si tu me lis, dois-je vraiment changer mes objectifs?

Merci mille fois, chers amis, pour vos retours, conseils, et critiques (constructives!),
Alain.
Je sais que je ne sais rien ( Socrate et ...moi! )

IOlivier

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Message par IOlivier »
Super l'acide lactique pour les parois extérieur des spores
Je me demande si le x100 ca vaut le coup...
Personne a un x60 pour comparer

J'ai des micros de bisporus sauvage x40 dans de l'eau.
mesure.jpg
mesure.jpg (61.2 Kio) Vu 662 fois
Fichiers joints
Still0055.jpg
Still0055.jpg (35.6 Kio) Vu 662 fois

Fouad

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Message par Fouad »
C'est top, comme on dit en Belgique, Alain, mais que s'est-il donc passé avec les spores oblongues de la psathyrelle (en chantier) qui sont devenues subglobuleuses ?!! Une observation à sec ? C'est possible, mais je n'ose pas poser la question :neutre:

Chimix

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Message par Chimix »
Bonsoir Fouad,

Merci pour ta réponse encourageante à propos de mes photographies! Je poursuis donc avec le même matériel optique et je tâche d'améliorer mes techniques de préparation!

En effet, j'ignorais à quel point le milieu de montage pouvait modifier les spores et donc leur apparence à l'oculaire. Mais quel est le milieu recommandé? Eau distillée? Sérum physiologique ( eau + NaCl 9g/l)? Acide lactique pur ou dilué? Ou autre chose encore...

Il est probable que mes photos des spores de psathyrelle ont été réalisées après un montage à sec! C'est déjà un "lointain" souvenir et je ne peux l'affirmer, mais c'est fort probable, je répète. De là toute cette embrouille, hélas! Bonne leçon pour moi, je la retiendrai!

Une remarque, en passant et en toute amitié, l'adjectif bruxellois signifiant "chouette" en français est "tof" et non pas "top"! On dira par exemple "een toffe job" pour traduire "un chouette boulot"!

J'attends donc des nouvelles du chantier en cours concernant notre chère psathyrelle,
Mille mercis encore Fouad et bonne soirée,
Alain.
Je sais que je ne sais rien ( Socrate et ...moi! )

Fouad

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Message par Fouad »
Oui, TOF !
Le liquide est primordial pour une bonne observation ; s'ajoute l'huile quand c'est en immersion.
Le milieu de base pour observer les spores, c'est l'eau (du robinet si elle n'est pas trouble). Dans le Melzer pour contrôler une éventuelle amyloïdité ou dextrinoïdie ou encore parfois dans le bleu coton ou le bleu de crésyl pour mettre en évidence certains caractères ou la cyanophilie.
Personnellement, il m'arrive de colorer les spores (au bleu de crésyl souvent) pour faciliter les mesures ou apprécier l'épaisseur de la paroi.
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